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鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素
更新時間:2022-03-31   點擊次數:1187次

鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素:


參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

AKIRIN2蛋白抗體

ADP核糖基化樣因子8B抗體

三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體

AKIRIN1蛋白抗體

錨定蛋白樣蛋白1抗體

腺苷酸激酶2抗體

黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體

未知糖基化轉移酶AER61抗體

鐵蛋白Fe65抗體

抑癌基因ras同源家族1抗體

轉錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體

心鈉素抗體

丙氨酰tRNA合成酶2抗體

絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體

核突觸蛋白α抗體

自噬相關蛋白4B抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體

α-輔肌動蛋白4(內參)抗體

堿性磷酸酶抗體

AU1 tag標簽抗體

脂肪細胞增強結合蛋白1

蛋白激酶B

蛋白激酶B

血管生成素樣蛋白2抗體

血管生成素3/血管生成素4抗體

膜粘連蛋白 I抗體

膜粘連蛋白 Ⅱ抗體

活化轉錄因子1抗體

水通道蛋白4抗體


 

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